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      免疫細胞技術

      發布時間: 2018-10-26
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      免疫細胞

      免疫細胞(immune cell)是白細胞的俗稱,包括淋巴細胞和各種吞噬細胞等,也特指能識別抗原、產生特異性免疫應答的淋巴細胞等。淋巴細胞是免疫系統的基本成分,在體內分布很廣泛,主要是T淋巴細胞、B淋巴細胞受抗原刺激而被活化,分裂增殖、發生特異性免疫應答。除T淋巴細胞和B淋巴細胞外,還有K淋巴細胞和NK淋巴細胞,共四種類型。除淋巴細胞外,參與免疫應答的細胞還有漿細胞、粒細胞、肥大細胞、抗原呈遞細胞及單核吞噬細胞系統的細胞。

      自體免疫細胞技術

      自體免疫細胞治療技術是指從自體外周血中分離的單個核細胞經過體外激活和擴增后輸入患者體內,直接殺傷腫瘤細胞或病毒感染細胞,或調節和增強機體的免疫功能。

      生物免疫治療的發展歷程

      源于20世紀80年代細胞生物學、分子生物學、腫瘤免疫學、生物工程學等諸多理論研究的深入,使得免疫治療有了更明確的目的性、靶向性和有效性,使得近二十多年來,生物免疫細胞治療已成為繼手術、放療、化療三大傳統療法最重要的輔助手段。

      LAK1982 年, Rosenberg 等提出淋巴細胞因子誘導的殺傷細胞概念,并對 LAK 細胞臨床應用進行了深入的探討。
      TILRosenberg 提出腫瘤侵潤淋巴細胞( TIL ),其腫瘤殺傷力較 LAK 有了明顯的提高,但細胞獲取的問題限制了 TIL 的應用。
      CD3-AK1989 年一個研究小組,用 CD3 單抗擴增小鼠脾細胞獲得一個細胞群,命名為 CD3 激活的殺傷細胞( CD3-AK) ,并且在體外顯示出較 LAK 更高的殺傷力。
      CIK1991 年 Stanford 大學骨髓移植中心的 Schmidt-Wolf 等以 IFN-r,IL-1, IL-2,CD3-mb 共培養 PBMC ,得到了一個強大抗腫瘤活性的細胞群,命名為細胞因子誘導的殺傷細胞 CIK 。主要效應細胞是 CD3+CD56+ ,是非 MHC 限制性。
      DC-CIK?DC 細胞(樹突狀細胞)是目前發現的體內最強的專職抗原提呈細胞,在抗腫瘤免疫反應中,能將腫瘤抗原遞呈給 CIK 細胞,引發機體產生抗腫瘤的免疫應答反應。


      ?腫瘤免疫細胞治療技術

      一、ECIK治療技術

      細胞因子誘導的殺傷細胞(Cytokine-induced killer cell,CIK)是一群增殖能力強、殺瘤活性高的免疫效應細胞。CIK中起殺傷作用的主要效應細胞是表達CD3+CD8+和CD3+CD56+兩種亞群,兼具有T細胞抗瘤活性和NK細胞的非MHC限制性殺傷優點,稱為NK樣的T細胞。

      腫瘤患者外周血來源的CIK過繼細胞免疫治療已廣泛應用于臨床。具有以下優點:(1)CIK細胞是活化的自體細胞,應用起來安全。(2)采血量少,最多抽血50ml;(3)CIK細胞增殖速度快,可以在短期內大量擴增,滿足臨床治療的需要。(4)CIK細胞殺瘤活性高,殺瘤譜廣,對多種耐藥腫瘤細胞同樣敏感。(5)CIK細胞是典型的個體化生物治療模式。它來源于自體 T 淋巴細胞,將這類細胞回輸后,可提高對腫瘤細胞的殺傷活性,還能提高機體的免疫能力,從而對腫瘤治療施以雙重作用。

      臍帶血CIK具有以下優點:(1)來源廣泛,前體細胞含量高,較易擴增出大量CIK;(2)淋巴細胞數量多,具有較強的增殖潛力;(3)免疫原性低,移植后移植物抗宿主?。℅raft-versus-host disease,GVHD)發生率低。臍血來源CIK為免疫力低下的晚期腫瘤患者的免疫治療提供了更優的選擇,很多患者在接受臍血CIK治療后,機體免疫力和功能得到恢復,為進行進一步的治療和康復奠定了基礎,增加了患者的臨床受益率和總體生存期。

      二、NK治療技術

      自然殺傷細胞(natural killer cells,NK)是與T、B細胞并列的第三類群淋巴細胞??煞翘禺愋灾苯託屑毎?,這種天然殺傷活性既不需要預先由抗原致敏,也不需要抗體參與,且無MHC限制。NK細胞是人體抵抗癌細胞和病毒感染細胞的防線,除了具有強大的殺傷功能外,還具有很強的免疫調節功能,與機體其他多種免疫細胞相互作用,調節機體的免疫狀態和免疫功能。

      NK細胞在抗腫瘤治療過程中的特點:(1)NK細胞增殖速度快,可以在短期內大量擴增,滿足臨床治療的需要。(2)NK細胞具有識別腫瘤的機制,對正常細胞無毒性作用。(3)NK細胞殺瘤活性高,殺瘤譜廣,對多種耐藥腫瘤細胞同樣敏感。(4)對正常骨髓造血前體細胞毒性很小。(5)能抵抗腫瘤細胞引發的效應細胞Fas-FasL凋亡。(6)由于NK細胞是活化的自體細胞,應用起來非常安全。

      三、TIL治療技術

      惡性頑固性胸腹水多數為晚期腫瘤或轉移瘤所引起的嚴重并發癥,也稱癌性胸腹水,用常規的手段治療效果不佳,不良反應大,且易反復。癌性胸腹水中的淋巴細胞是一種特殊形式的腫瘤浸潤淋巴細胞(TIL細胞),主要源于T淋巴細胞,它對腫瘤細胞具有一定的識別能力,殺傷活性高。

      從癌性胸腹水中分離并提取TIL細胞,經一系列細胞因子體外誘導并擴增后將其回輸到患者的胸腹腔中,可通過以下幾個途徑發揮治療作用:(1)TIL細胞能特異性識別并殺傷自體腫瘤細胞,引起腫瘤供血血管的損傷,使其閉塞,減少滲出并發揮抗腫瘤作用,有效抑制腫瘤細胞的正常生長;(2)TIL細胞可抑制腫瘤細胞產生能損傷腹膜表面的蛋白因子,抑制細胞內組織胺成分的釋放,以減輕腹膜表面的滲出,并促進損傷的腹膜表面的修復,使滲出液盡快吸收,從而達到治療作用;(3)提高機體免疫功能。

      四、DC-CIK治療技術

      DC-CIK免疫細胞治療,是在體外分離培養外周血細胞,誘導其分化為樹突狀細胞(DC),再用經抗原刺激的樹突狀細胞誘導CIK細胞產生特異性腫瘤殺傷作用的治療技術,即CIK與DC細胞進行共同培養而成的殺傷性細胞群體(DC-CIK)。其殺傷機制表現為直接殺傷作用和免疫效應細胞參與的間接殺傷作用 ,這對于細胞免疫功能低下的患者,尤其是白血病患者更為適合,并且能起到清除患者體內微小殘留病灶的作用。

      免疫細胞治療腫瘤的臨床新發展是DC+CIK細胞聯合應用,可致療效進一步提高。該種治療方式具有以下特點:(1)特異性:DC細胞識別,直接吞噬腫瘤細胞,CIK細胞非特異性殺傷腫瘤細胞;只對腫瘤細胞進行有效攻擊,不傷害正常組織細胞;(2)安全性:利用人體自身細胞殺死腫瘤細胞,無毒副作用。(3)持久性:增強機體免疫系統,恢復機體免疫功能,持久殺傷腫瘤細胞;(4)徹底性:提高機體免疫能力,有效治療大多數實體腫瘤,并能消滅對放、化療不敏感及轉移的腫瘤細胞,清除體內殘留腫瘤細胞和微小轉移病灶;(5)廣泛性:重建和提高患者全身的機體免疫功能,全面識別、搜索、殺傷腫瘤細胞,有效防止腫瘤的復發和轉移,對體內各種腫瘤細胞均能有效治療。

      五、抗原致敏的DC細胞(APDC)治療技術

      抗原致敏的人樹突狀細胞(APDC)是一種針對多種晚期腫瘤的特異性的治療性疫苗?;驹硎菑幕颊咦泽w外周血中分離的單核細胞,在體外特定條件下誘導成為具有強大抗原提呈功能的DC,在體外經腫瘤抗原致敏,再將致敏的 DC 回輸至患者體內,攜帶腫瘤抗原的 DC 會將抗原信息提呈給特異性T細胞并使之活化,從而誘導機體產生大量具有特異性細胞毒性功能的 T 淋巴細胞(CTL),對腫瘤細胞具有特異性殺傷作用。

      六、瘤苗致敏的DC-CIK治療

      在體外用腫瘤細胞株作為瘤苗致敏DC細胞,使DC細胞負載上腫瘤特異性的抗原,再將該DC細胞與CIK細胞共培養達到一定細胞數后回輸給患者。負載腫瘤抗原的DC不僅能呈遞更全面的抗原信息給CIK細胞,增強其特異性殺傷作用,減少腫瘤的免疫逃逸,且負載抗原的DC更易分化成熟,從而分泌更多促進CIK細胞成熟活化的細胞因子,提高CIK細胞的特異性抗腫瘤活性。

      七、 ATTTM靶向腫瘤免疫治療技術

      ATTTM靶向腫瘤免疫治療技術,是最新開發的通過雙特異性抗體(Bispecific Antibodies,BsAb)介導的T細胞靶向腫瘤免疫治療新技術之一,其原理是:將分別能夠識別T細胞抗原和腫瘤抗原的兩種抗體通過化學交聯或基因工程手段形成單一的雙特異性抗體分子(BsAb),此種抗體分子具有同時結合T細胞和表達特異性腫瘤抗原的腫瘤細胞的能力。因此從患者分離單核細胞在體外經細胞因子誘導擴增并激活,此時將雙特異性抗體與體外擴增激活的T細胞結合,通過雙特異性抗體回輸患者體內的T細胞能夠大大增強識別腫瘤的能力,從而提高殺瘤效應,療效提高顯著。

      八、嵌合抗原受體基因修飾的T細胞靶向腫瘤治療技術

      經過分離和體外擴增以后,抗原特異性T細胞能夠識別并殺死腫瘤,有時獲得的應答效率遠優于標準治療。嵌合抗原受體作為一種能夠重新定向T淋巴細胞到腫瘤細胞的的分子,目前正用在癌癥免疫治療領域。

      嵌合抗原受體(Chimeric Antigen Receptors,CARs)的技術設計原理是:將識別腫瘤相關抗原(TAA) 的單鏈抗體(scFv)、跨膜的共刺激結構域(如CD28和CD4-1BB)和T細胞的活化基序(如CD3復合物(ζ鏈)胞內結構域)結合為一體,通過基因轉導方法轉染T淋巴細胞,經基因修飾的T細胞通過表達單鏈抗體增強結合腫瘤細胞的能力,同時通過共刺激信號和活化基序的表達激活T細胞的增殖和細胞毒活性,即將抗體對腫瘤抗原的高親和性和T淋巴細胞的殺傷機制有機結合,使其能特異性地識別和殺傷腫瘤細胞,對可明確表達特定腫瘤抗原的患者的臨床療效提高非常明顯。

      在理論上,表達嵌合抗原受體的T細胞較其他基于T細胞治療方式存在以下優勢:① 使用患者自體細胞,降低排異反應風險;② CAR T細胞易于制備,同一嵌合抗原受體結構可用于多例患者治療;③ 多種細胞表面分子均可成為嵌合抗原受體潛在靶點;④ CAR T細胞作用過程不需要主要組織相容性復合物(MHC)介導,對MHC丟失或抗原呈遞改變的腫瘤細胞同樣有效。


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